fa شناسایی اپی توپ های سلول T مربوط به آنتی ژن MPB51 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در موش های BALB/c عمومى General تحقيقي Original Articles زمینه و هدف: سلول های T کمکی نوع یک (Thl) و لنفوسیت های CD8+T نقش به سزایی در برقراری حفاظت مقابل عفونت با مایکوباکتریوم توبرکلوزیس دارند. MPB51 یکی از پروتیین های ترشحی مایکوباکتریوم می باشد که باعث تحریک پاسخ ‌های ایمنی هومورال و سلولی در طی عفونت با باسیل های سل می گردد. هدف از این مطالعه شناسایی اپی توپ های غالب لنفوسیت های T از مولکول MPB51 در موش ‌های BALB/c می باشد.روش بررسی: این مطالعه تجربی از تیر ماه 1381 لغایت اسفند ماه 1381 انجام گردید. DNA کد کننده مولکول MPB51 ابتدا در پلاسمیدهای pCI کلون گردید. پس از ایجاد گلوله های ژنی حاوی ذرات طلای پوشیده شده از ژن MPB51، با استفاده از تفنگ ژنی (Gene gun) موش های سفید نژا د BALB/c مورد واکسیناسیون قرار گرفتند. دو هفته بعد از آخرین ایمن سازی سلول های طحالی استخراج شد و در حضور یا عدم حضور مجموعه ای از پپتیدهای هم پوشان سنتتیک توالی کامل مولکول MPB51 در محیط کشت RPMI1640 حاوی 10در صد FCS کشت داده شد. تولید IFN-γ داخل سلول و سوپ کشت سلولی به ترتیب با روش فلوسیتومتری و ELISA بررسی گردید.یافته ها: نتایج نشان داد که واکسیناسیون DNA باعث ایجاد پاسخ ایمنی قوی تنها در برابر پپتید حاوی اسید آمینه 40-21P می شد. آنالیز های بیشتر با استفاده از الگوریتم های کامپیوتری امکان شناسایی اپی توپ نه اسید آمینه ای 32-P24 را به عنوان اپی توپ غالب سلول CD8+T فراهم نمود.نتیجه گیری: این تحقیق مشخص ساخت کمپلکس MHC کلاس یک - پپتید (P24-32/H2-Dd) توسط سلول های T سیتوتوکسیک (CTL) تولید کننده IFN-γ شناسایی می گردد. با استفاده از روش حذف دستجات لنفوسیت های T مشاهده شد لنفوسیت های CD8+T تنها سلول های پاسخگو در برابر پپتید ایمونوژن 32-24P در موش های BALB/c می باشند. نتایج به دست آمده از این تحقیق علاوه بر آنکه به شناخت مکانیسم های پاسخ های ایمنی سلولی در برابر توبرکلوزیس کمک می نماید، در طراحی واکسن موثرتری در مقابل عفونت M.tuberculosis نیز مفید خواهد بود. Background&Objective: Both CD4+ type 1 helper (Th1) cells and CD8+ T cells play effective roles in protection against Mycobacterium tuberculosis infection. MPB51, a major mycobacterial secreted protein, induces humeral and cellular immune responses against mycobacterial infection. In addition, DNA vaccine encoding MPB51 can induce cellular immune responses and protective immunity upon challenge with M.tuberculosis. This study address to identify T-cell immunodominant epitopes on MPB51 in BALB/c mice. Materials&Methods: We cloned DNA encoding MPB51 molecule in pCI plasmid. After constructing MPB51 DNA-covered gold cartridge, BABL/c mice were immunized by using a gene gun system. Two weeks after the last immunization, the immune spleen cells were cultured in response to synthetic overlapping library peptides covering the mature MPB51 sequence or medium alone. Intracellular and cell culture supernatant gamma interferon (IFN-) production was analyzed by using flow cytometry and ELISA, respectively. Results: The findings of present study indicate that DNA vaccination can course strong mmune response only against the peptides contain 21-40 aminoacids. Further analysis with a computer – assisted algorithm permitted the identification of nine aminoacids of (P24-32) as immunodominant CD8+ T cell epitope. Conclusion: This study proved than the MHC class I-peptide (H2-Dd-P24-32) complex is recognized by (IFN-)–producing CD8+ T cells. We observed by using T-cell subset depletion that CD8+ T cells are the only P24-32-responded T-cells in BABL/c mice. The data obtained are useful for identifying cellular immune responses against TB and for designing a new vaccine against M.tuberculosis infection. اپی توپ سلول T, توبرکلوزیس, MPB51, واکسن ژنتیکی T-cell epitope, Tuberculosis, MPB51, DNA vaccine 18 25 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1-6&slc_lang=fa&sid=1 AR.Rafiei (PhD) علیرضا رفیعی 5900319475328460048400 5900319475328460048400 Yes Y.Kuade (PhD) یوکیدو کویاد 5900319475328460048401 5900319475328460048401 No