fa میزان بیان پلی‌مورفیسم D299G و T399I ژن TLR4 در رده سلولی سرطان کولورکتال به روش فلوسایتومتری ژنتیک Genetic تحقيقي Original Articles زمینه و هدف : گیرنده‌های شبه Toll (TLRs) به عنوان مهم‌ترین گیرنده‌ها در ایمنی ذاتی شناخته شده‌اند. گیرنده TLR4 به عنوان گیرنده اصلی در شناسایی لیپوپلی‌ساکارید (LPS) باکتری‌های گرم منفی عمل می‌کند. دو پلی‌مورفیسم rs4986790) D299G (SNP و (SNP rs4986791) T399I در ژن این گیرنده موجب کاهش پاسخ‌دهی به LPS می‌شود. این مطالعه به منظور تعیین میزان بیان پلی‌مورفیسم‌های مختلف ژن TLR4 در رده سلولی سرطان کولورکتال HT29 ، HCT116 و CaCo2 به روش فلوسایتومتری انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه آزمایشگاهی انتقال پلاسمید حاوی ژن واریته‌های مختلف شامل Flag-tagged-TLR4وحشی، Flag-tagged D299G و Flag-tagged T399I موتان به سلول‌های HCT116 توسط معرف Turbofect صورت گرفت. راندمان انتقال ژن توسط پلاسمید GFP ارزیابی شد. میزان بیان واریته‌های مختلف TLR4 در سلول‌های دریافت کننده ژن‌ها از طریق فلوسایتومتری بررسی شد. داده‌ها با استفاده از نرم‌افزار آماری SPSS-11.5 و آزمون Chi-Square تجزیه و تحلیل شدند. یافته‌ها : رده‌های سلولی HT29 و CaCo2گیرنده TLR4 را در سطح پایینی بیان کردند. در حالی که سلول‌های HCT116 قبل از انتقال پلاسمید، ژن TLR4 را در سطح قابل ردیابی به روش فلوسایتومتری بیان نکردند. راندمان انتقال ژن GFP به داخل سلول‌های HCT116 به‌وسیله آنالیز میکروسکوپی و فلوسایتومتری حدود 80 درصد اندازه‌گیری شد. براین اساس میزان بیان TLR4و پاسخ‌دهی به LPS در سلول‌هایی که ژن واریته وحشی TLR4 را دریافت کردند؛ به‌طور معنی‌داری بیشتر از سلول‌هایی بود که ژن واریته موتان را دریافت کردند (P<0.05). نتیجه‌گیری : سطح پایین بیان TLR4 روی سلول‌های دارای نوع موتان گیرنده نشان داد که این پلی‌مورفیسم‌ها روی بیان گیرنده در سلول‌های سرطان کولون اثر دارند. Background and Objective: Toll-like receptors (TLRs) have been discovered as the most important receptors in innate immunity. One of the most important TLRs is TLR4, the key receptor for the LPS component of gram-negative bacteria. Two polymorphisms, D299G (rs4986790) and T399I (rs4986791), in TLR4 gene are associated with a decreased response to LPS. This study was done to estimate the expression of different polymorphisms of TLR4 gene in colorectal cancer cell line by flowcytometery. Materials and Methods: In this laboratory study, the HCT116 cells were transfected with plasmids containing different variants of TLR4 gene including Flag-tagged-TLR4 wild type, flag-tagged D299G and T399I Using TurboFect transfection reagent. Transfection efficiency was evaluated by GFP plasmid. Expression of different variants of TLR4 was assessed in transfected cells by flowcytometery. Data were analyzed using SPSS-11.5 and chi-square test. Results: TLR4 was detected on HT29 and CaCo2 cell lines at low levels. HCT116 cells did not express detectable amounts of TLR4 by flowcytometery prior to transfection. Gene transfer efficiency for GFP plasmid was about 80% in HCT116 cells by flowcytometery and microscopic analysis. TLR4 expression and LPS responsiveness significantly was higher in HCT116 cells which were transfected with wild type TLR4 gene compared to non-transfected and mutant transfected cells (P<0.05). Conclusion: Lower expression of TLR4 on cells with mutant TLR4 showed that these polymorphisms affect on expression patterns of TLR4 on colon cancer cells. ژن TLR4 , پلی‌مورفیسم , LPS , رده سلولیHCT116 TLR4 gene, Polymorphism, LPS, HCT116 cell line 47 53 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1-665&slc_lang=fa&sid=1 Davoodi H هما داودی homdavoodi@yahoo.com 5900319475328460050602 5900319475328460050602 Yes PhD in Immunology, Faculty of Medicine, Golestan University of Medical Sciences, Golestan, Iran دکتری ایمنی‌شناسی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گلستان Hashemi SR سیدرضا هاشمی 5900319475328460050603 5900319475328460050603 No Assistant Professor, Faculty of Animal Sciences, Gorgan University of Agricultural Sciences and Natural Resources استادیار گروه فیزیولوژی، دانشکده علوم دامی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان Seow HF هنگ فنگ سیااو 5900319475328460050604 5900319475328460050604 No Professor, Department of Pathology, Medicine Faculty, UPM University, Malaysia استاد گروه آسیب‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه یو پی ام مالزی