fa کلونینگ و بیان ژن اورات اکسیداز استرپتومایسس جدا شده از دریا در باکتری اشریشیاکلی اوریگامی بیوتکنولوژی پزشکی Medical Biotecnology تحقيقي Original Articles <p style="font-style:normal;"><em><span style="font-size:14px;"><span style="font-family:Times New Roman;"><strong>زمینه و هدف:</strong> استرپتومایسس‌ها باکتری‌های رشته‌ای گرم مثبت و هوازی هستند که از منابع متفاوت جدا می‌شوند. این باکتری‌ها توانایی تولید متابولیت‌های ثانویه و مواد فعال بیولوژیکی را دارند و از این جهت در زمینه بیوکنترل بسیار حائز اهمیت هستند. اورات اکسیداز یکی از فراورده‌های آنزیمی میکروبی است که از منابع مختلفی از جمله استرپتومایسس قابل استخراج است. این مطالعه به منظور کلونینگ و بیان ژن اورات اکسیداز استرپتومایسس جدا شده از دریا در باکتری اشریشیاکلی اوریگامی انجام شد.<br> <strong>روش بررسی:</strong> در این مطالعه توصیفی تعداد 60 نمونه آب و رسوب از اعماق متفاوت سواحل دریای خزر در استان مازندران جمع‌آوری گردید. آزمون‌های رنگ آمیزی گرم، متیل رد،<span dir="LTR">VP</span>، سیترات، هیدرولیز نشاسته، هیدرولیز کازئین، احیا نیترات، اکسیداز وکاتالاز برای تعیین هویت و جداسازی استرپتومایسس دریا انجام شد. ژن اورات اکسیداز توسط روش کلونینگ <span dir="LTR">T-A</span> با استفاده از وکتور <span dir="LTR">PTG-19</span> در درون میزبان اشریشیاکلی اوراگامی کلون گردید. بیان ژن کلون شده در کلنی‌های نوترکیب توسط روش <span dir="LTR">Real time PCR</span> بررسی شد. با استفاده از نرم‌افزارهای <span dir="LTR">clustalX</span> و <span dir="LTR">Mega5</span>درخت فیلوژنی رسم گردید.<br> <strong>یافته‌ها:</strong> غربالگری نمونه‌های آب دریا 12 ایزوله استرپتومایسس را شناسایی کرد که همگی دارای ژن اورات اکسیداز بودند. بیان ژن اورات اکسیداز در اشریشیاکلی اوریگامی توسط روش <span dir="LTR">Real-Tima PCR</span> به اثبات رسید. نتـایج بررسی‌های فیلوژنتیکی، برخی خویشاوندان نزدیک استرپتومایسس را به عنوان کاندید مطالعات بعدی معرفی نمود.<br> <strong>نتیجه‌گیری:</strong> باکتری استرپتومایسس می‌تواند به عنوان منبع غنی از متابولیت‌های ثانویه با کاربردهای فراوان مورد توجه قرار گیرد و به عنوان سویه‌ای بومی به منظور تولید آنزیم اورات اکسیداز به کار رود. با به کار بردن میزبان‌های کلونینگ مختلف و بررسی شرایط بهینه تولید، این سویه می‌تواند نامزد مطالعات آینده به منظور ساخت داروها و ترکیبات ضدمیکروبی باشد.</span></span></em></p> <strong>Background and Objective: </strong><em>Streptomyces</em> are gram-positive and aerobic bacterial strains that are isolated from different sources. <em>Streptomyces</em> have the ability to produce secondary metabolites and biologically active substances and are therefore very important in the field of biocontrol. <em>Urate oxidase</em> is a microbial enzyme product that can be extracted from a variety of sources, including streptomycin. In the present study, cloning of the <em>urate oxidase</em> gene isolated from seawater streptomycosis was performed in <em>Escherichia coli</em> <em>Origami</em> bacteria.<br> <strong>Methods: </strong>In this descriptive study, a total of 60 water and sediment samples were collected from different depths of the Caspian Sea coast in Mazandaran province, Iran. The Geram, staining methyl red, VP, citrate, starch hydrolysis, casein hydrolysis, nitrate reduction, oxidase and catalase tests were performed to identify and isolate <em>Streptomyces</em>. The <em>urate oxidase</em> gene was cloned using the T-A cloning method using the PTG-19 vector inside the host of <em>Escherichia coli Origami</em>. The expression of cloned genes in recombinant colonies was investigated by Real-Time PCR. The phylogenetic tree was drawn using clustalX and Mega5 software.<br> <strong>Results:</strong> Screening of marine water samples identified 12 isolated <em>streptomyces</em>, all of which had the <em>urate oxidase</em> gene. The expression of <em>urate oxidase</em> gene in <em>Escherichia coli</em> <em>Origami</em> was confirmed by Real-Time PCR. The results of phylogenetic studies identified some close relatives of <em>Streptomyces</em> as candidates for subsequent studies.<br> <strong>Conclusion:</strong> <em>Streptococcus</em> bacteria can be considered as a rich source of secondary metabolites with many applications and can be used as a native to produce the enzyme <em>urate oxidase</em>. By using different cloning hosts and examining optimal production conditions, this strain can be a candidate for future studies to develop antimicrobial drugs and compounds.<br> <strong><span dir="RTL"></span></strong> کلونینگ , اورات اکسیداز , Real Time PCR , دریای خزر Cloning,Urate Oxidase,Real Time PCR,Caspian Sea, 84 90 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-3267-1&slc_lang=fa&sid=1 Nayyereh Sadat Jenaban نیره سادات جنابان 5900319475328460065166 5900319475328460065166 No M.A in Biology, Department of Biology, East Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran. کارشناس ارشد زیست شناسی، گروه زیست شناسی، واحد تهران شرق، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. Elahe Ali Asgari الهه علی عسگری e.asgari@gmail.com 5900319475328460065167 5900319475328460065167 Yes Assistant Professor, Department of Biology, East Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran. استادیار، گروه زیست شناسی، واحد تهران شرق، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. Kumarss Amini کیومرث امینی 5900319475328460065168 5900319475328460065168 No Associate Professor, Department of Microbiology, School of Basic Sciences, Saveh Branch, Islamic Azad University, Saveh, Iran. استادیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران.