fa اثر هرسپتین نوترکیب بر رشد سلول‌های سرطانی پستان بیوتکنولوژی پزشکی Medical Biotecnology تحقيقي Original Articles <p style="font-style:normal;"><em><strong>زمینه و هدف:</strong> سرطان پستان یکی از شایع‌ترین انواع سرطان در میان زنان است . مولکول HER-2 به‌عنوان گیرنده تیروزین کینازی از خانواده گیرنده‌های رشد عامل اپیدرمی، عامل اصلی سرطان است. مولکول پروتئینی هرسپتین که یک آنتی‌بادی ضد HER-2 است؛ می‌تواند نقش مهمی در تشخیص و درمان سرطان پستان داشته باشد. این مطالعه به منظور ساب کلون کردن ژن هرسپتین و سپس بیان در سیستم پروکاریوتی (E.coli) و تولید هرسپتین نوترکیب به منظور استفاده در درمان سرطان پستان انجام شد.<br> <br> <strong>روش بررسی:</strong> در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی ژن هرسپتین از سازه سنتزی با روش هضم آنزیمی جدا و درون وکتور بیانی pET28a انتقال داده شد. زیر همسانه‌سازی ژن موردنظر با استفاده از PCR و هضم آنزمی تایید گردید. پس از انتقال وکتور نوترکیب به میزبان E.coli BL21 DE3 ، با استفاده از القاگر IPTG ژن نوترکیب هرسپتین بیان شد. پروتئین نوترکیب با استفاده از SDS-PAGE ارزیابی و تخلیص با ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی نیکل انجام شد و در نهایت توسط وسترن بلاتینگ با استفاده از آنتی‌بادی ضدهیستیدین تایید شد. میزان کشندگی و زنده ماندن سلول‌ها در مجاورت با هرسپتین نوترکیب با روش MTT بررسی شد.<br> <br> <strong>یافته‌ها:</strong> پس از ساب کلونینگ ژن هرسپتین، PCR و هضم آنزیمی، قطعه 741 جفت بازی ژن هرسپتین را تایید کرد. بیان پروتئین نوترکیب هرسپتین و ارزیابی آن بر روی ژل SDS-PAGE اندازه حدود 27 کیلودالتون را تایید کرد. پروتئین نوکیب با استفاده از آنتی‌هیستیدین نیز تایید شد. پروتئین خالص شده در مجاورت با لاین سلول SKBR3 توانایی متوقف کننده رشد سلول‌های سرطانی را داشت.<br> <br> <strong>نتیجه‌گیری:</strong> با توجه به این که آنتی‌ژن HER2 به وفور بر سطح سلول‌های سرطانی پستان بیان می‌شود؛ پروتئین هرسپتین می‌تواند به‌عنوان یک آنتی‌بادی بازدارنده عمل نموده و رشد سلول‌های سرطانی پستان را مهار کند.</em></p> <em><strong>Background and Objective: </strong>Breast cancer is one of the most common types of cancer among women. HER-2 molecule as the receptor of tyrosine kinase from the family of epithermal growth factor is a major cause of cancer. The Herceptin protein molecule, which is an anti-HER-2 antibody, can play an important role in the diagnosis and treatment of breast cancer. This study was done to subcloning of Herceptin gene, expression in the prokaryotic system (E.coli) and produce Herceptin recombinant protein for use in the treatment of breast cancer.<br> <br> <strong>Methods: </strong>In this descriptive &ndash; laboratory study, Herceptin gene from synthesized construct was isolated by enzyme digestion, and then subcloned to the expression vector pET28a. Subcloning of the gene was confirmed using PCR and enzyme digestion. After transferring the vector into E.coli BL21 DE3, expression of the recombinant Herceptin gene was induced by IPTG. The recombinant protein was evaluated by SDS-PAGE and purified with Ni-NTA column chromatography and finally verified by western blotting using anti-histidine antibody. The survival of cells adjacent to recombinant Hercaptin by MTT was investigated.<br> <br> <strong>Results: </strong>Following the subcloning of the Herceptin gene, PCR and enzyme digestion, the 741 fragment of the Herceptin gene was confirmed. Confirmation of Herceptin&#39;s recombinant protein and its evaluation on SDS-PAGE gel about 27 kDa was done. The recombinant protein was also confirmed with anti-histidine tag. The purified protein adjacent to the SKBR3 cell line was able to block the growth of cancer cells.<br> <br> <strong>Conclusion: </strong>Regarding the expersion of HER2 antigen on surface of breast cancer cells, Herceptin can act as antibody blocker and it arrests the growth of breast cancer cells.</em><br> <span dir="RTL"></span> سرطان پستان , هرسپتین نوترکیب , آنتی ژن her-2 , سلول سرطانی Breast cancer, Recombinant Herceptin, Her-2 antigen, Cancer cell 120 127 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1709-2&slc_lang=fa&sid=1 Nafiseh Kiarostami نفیسه کیارستمی 5900319475328460053483 5900319475328460053483 No M.Sc in Biology, Department of Biology, Faculty of Basic Science, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damghan, Iran کارشناس ارشد زیست شناسی - ژنتیک، گروه زیست شناسی، واحد دامغان، دانشگاه آزاد اسلامی، دامغان، ایران Jafar Amani جعفر امانی jafar.amani@gmail.com 5900319475328460053484 5900319475328460053484 Yes Associate Professor, Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشیار، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران Abbas Ali Imani Fooladi عباسعلی ایمانی فولادی 5900319475328460053485 5900319475328460053485 No استاد، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران Ali Mirhosseini سیدعلی میرحسینی 5900319475328460053486 5900319475328460053486 No Assistant professor, Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran استادیار، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران