fa اثر والپروئیک اسید بر بیان ژن Bim و زیست‌پذیری سلول‌های سرطان تخمدان رده A2780 انكولوژي Oncology تحقيقي Original Articles <h1 dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:14.15pt;margin-bottom:0cm;margin-left:14.2pt;margin-bottom:.0001pt;page-break-after:auto;"><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف : سرطان تخمدان پنجمین سرطان شایع در زنان بوده و تعداد مبتلایان به این بیماری رو به افزایش است. والپروئیک اسید یک مهار کننده هیستون داستیلاز است که به‌طور موثر برای درمان صرع و بیماری‌های دوقطبی به‌کار می رود. اخیراً این ترکیب به عنوان دارویی با عملکردهای ضدسرطانی مورد توجه قرار گرفته است. ژن </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">Bim</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> یکی از مهم‌ترین ژن‌های مسیر داخلی (میتوکندریایی) آپوپتوز است که نقش مهمی در بیولوژی سرطان دارد. بیان این ژن در سرطان تخمدان به شدت کاهش می‌یابد. این مطالعه به منظور تعیین اثر والپروئیک اسید بر زیست‌پذیری سلول‌های سرطان تخمدان، آپوپتوز و نیز بیان ژن </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">Bim</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> در رده </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">A2780</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> انجام شد.</span></span></span></span></h1> <h1 dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:14.15pt;margin-bottom:0cm;margin-left:14.2pt;margin-bottom:.0001pt;page-break-after:auto;"><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;">روش بررسی : در این مطالعه توصیفی - تحلیلی سلول‌های سرطان تخمدان (</span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">A2780</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;">) در محیط کشت </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">RPMI-1640</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> در شرایط بهینه تکثیر شدند. سپس سلول‌ها با غلظت‌های مختلف والپروئیک اسید (30-1میلی مولار) تیمار و به مدت 24، 48 و 72 ساعت انکوبه شدند. پس از پایان زمان انکوباسیون، زیست‌پذیری سلول‌ها با استفاده از روش </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">MTT</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> ارزیابی شد. آنالیز آپوپتوز در جمعیت سلولی تیمار شده با والپروئیک اسید با استفاده از روش فلوسایتومتری انجام گردید. از آزمون </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">Real time PCR</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> برای تعیین اثر این دارو بر تغییر بیان ژن </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">Bim</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> استفاده شد.</span></span></span></span></h1> <h1 dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:14.15pt;margin-bottom:0cm;margin-left:14.2pt;margin-bottom:.0001pt;page-break-after:auto;"><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته‌ها : نتایج حاصل از تست </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">MTT</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> نشان داد که داروی والپروئیک اسید باعث کاهش زیست‌پذیری سلول‌های </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">A2780</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> می‌شود و این اثر وابسته به غلظت و زمان بود. به‌طوری که در غلظت 30 میلی‌مولار و 72 ساعت پس از تیمار، کاهش زیست‌پذیری به بالاترین میزان رسید (</span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">P<0.05</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;">). درصد قابل توجهی از سلول‌ها در اثر تیمار با والپروئیک اسید دچار آپوپتوز شدند. همچنین والپروئیک اسید میزان بیان ژن </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">Bim</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> را افزایش داد (</span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">P<0.05</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;">).</span></span></span></span></h1> <h1 dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:14.15pt;margin-bottom:0cm;margin-left:14.2pt;margin-bottom:.0001pt;page-break-after:auto;"><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری : داروی والپروئیک اسید سبب کاهش زیست‌پذیری سلول‌های </span></span></span></span><span dir="LTR" style="layout-grid-mode:line;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">A2780</span></span></span></span><span style="layout-grid-mode:line;font-weight:normal;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:tahoma,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> می‌شود. همچنین والپروئیک اسید از طریق تغییر بیان ژن‌های دخیل در مسیر داخلی آپوپتوز، سبب افزایش مرگ سلولی در سلول‌های سرطان تخمدان می‌شود.</span></span></span></span></h1> <strong>Background and Objective: </strong>Ovarian cancer is the fifth common cancer among women and the number of new cases is increasing. Valproic acid is a histone deacetylase inhibitor effectively used to treat epilepsy and bipolar disease. Recently, this compound has attracted attention as an anti-cancer agent. Bim is one of the most important genes of mitochondrial pathway of apoptosis, and it plays an important role in the biology of cancer. Expression of this gene is greatly reduced in ovarian cancer. This study was done to evaluate the effect of valproic acid on the viability of ovarian cancer cells, apoptosis and Bim gene expression in A2780 line.<br> <strong>Methods: </strong>In this experimental study, the human ovarian cancer cells (A2780) were grown in RPMI-1640 medium in appropriate culture conditions. The cells were treated by various concentrations valproic acid (1-30 mM) and were incubated for 24, 48 and 72 hours. After the incubation of period, cell viability was investigated using MTT. Apoptosis was analyzed by flow-cytometry method in the cells were treated by valproic acid. The Real time PCR test was used to assess the effect of this drug on the expression of Bim gene.<br> <strong>Results: </strong>The results of MTT assay showed that valproic acid reduced the viability of A2780 cells, and this effect was time and dose-dependent. The reduction of cell viability at 30 mM concentration and 72 hours after treatment, was maximum and statistically significant (P<0.05). Exposure to valproic acid significantly increased the percentage of apoptotic cells (P<0.05). Also, Valproic acid significantly increased the expression of Bim (P<0.05).<br> <strong>Conclusion: </strong>Valproic acid reduced viability in ovarian cancer cell line A2780. Valproic acid increased cell death by altering the expression of genes involved in apoptosis in ovarian cancer cell line A2780. سلول‌های سرطان تخمدان رده A2780 , والپروئیک اسید , زیست پذیری , ژن Bim , روش MTT , فلوسایتومتری Ovarian cancer cell line A2780, Valproic acid, Viability, Bim gene, MTT method, flow-cytometry 60 66 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1-993&slc_lang=fa&sid=1 Z Amini-Farsani زینب امینی فارسانی 5900319475328460049383 5900319475328460049383 No Ph.D Candidate in Biology-Genetics, Department of Biology, University of Sistan and Baluchestan, Zahedan, Iran دانشجوی دکتری تخصصی زیست شناسی - ژنتیک، گروه زیست شناسی، دانشگاه سیستان و بلوچستان، زاهدان، ایران MH Sangtarash محمدحسین سنگتراش sangtarash@science.usb.ac.ir 5900319475328460049384 5900319475328460049384 Yes Associate Professor, Department of Biology, Faculty of Science, University of Sistan and Baluchestan, Zahedan, Iran دانشیار، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه سیستان و بلوچستان، زاهدان، ایران H Teimori حسین تیموری 5900319475328460049385 5900319475328460049385 No Associate Professor, Cellular and Molecular Research Center, Basic Health Sciences Institute, Shahrekord University of Medical Sciences, Shahrekord, Iran دانشیار، مرکزتحقیقات سلولی و مولکولی، پژوهشکده علوم پایه سلامت، دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، شهرکرد، ایران M Shamsara مهدی شمس آرا 5900319475328460049386 5900319475328460049386 No Assistant Professor, National Research Center for Transgenic Mouse, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology, Tehran, Iran استادیار، مرکز ملی تحقیقات موش تراریخت، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران