fa کلونینگ و بیان پروتئین پاراتیروئید به صورت محلول در باکتری اشریشیاکلی بیوتکنولوژی پزشکی Medical Biotecnology تحقيقي Original Articles زمینه و هدف : ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﭘﺎراﺗﯿﺮوﺋﯿﺪ در ﻫﻤﻮﺳﺘﺎزی ﮐﻠﺴﯿﻢ ﺑﺪن ﻧﻘﺶ اﺳﺎﺳﯽ دارد. ﺑﺎ اﻓﺰایﺶ ﺳﻦ و ﺳﺎیﺮ ﻋﻮاﻣﻞ، ایﻦ ﻫﻮرﻣـﻮن ﻗـﺎدر ﺑـﻪ اﻧﺠﺎم ﻧﻘﺶ ﺧﻮد در ﺑﺪن ﻧﯿﺴﺖ؛ ﺑﻪ ﻃﻮری ﮐﻪ ﻓﺮد دﭼﺎر ﭘﻮﮐﯽ اﺳﺘﺨﻮان ﻣﯽشود. استفاده از پروتئین نوترکیب پاراتیروئید، مانع پیشرفت بیماری شده و به بهبودی آن کمک می‌کند. این مطالعه به منظور طراحی و ساخت سازه ژنی و انجام فرایند کلونینگ و ساب‌کلونینگ پروتئین پاراتیروئید به صورت محلول در باکتری اشریشیاکلی انجام شد. روش بررسی : این مطالعه توصیفی با طراحی و اپتیمایز کردن سکوانس ژن هورمون پاراتیروئید برای بیان پروتئین نوترکیب به‌صورت محلول انجام شد. بعد از ترانسفورم کردن سازه ژنی داخل باکتری و کشت باکتری اشریشیاکلی، استخراج پلاسمید انجام شد. قطعه کدکننده پروتئین موردنظر به روش هضم آنزیمی جدا و در ادامه به وکتور بیانی منتقل گردید. سپس عمل القا صورت گرفت و پروتئین مورد نظر در باکتری بیان شد. یافته‌ها : بعد از برش آنزیمی، قطعه کدکننده پروتئین پاراتیروئید به درستی در محل موردنظر قرار گرفت. فرایند مذکور به روش واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز (PCR) تائید گردید. بعد انجام عمل ترانسفورم، فرایند القا صورت گرفت که در نهایت پروتئین پاراتیروئید به‌صورت محلول در باکتری بیان شد. نتیجه‌گیری : بیان پروتئین در باکتری به دلیل رشد سریع آن و نیاز به محیط کشت ارزان مقرون به‌صرفه است. بیان پروتئین به‌صورت محلول باعث کوتاه شدن فرایند پایین دستی تولید پروتئین نوترکیب گردید. Background and Objective: Parathyroid proteins involved in calcium homeostasis. With increasing age and other relevant factors, this hormone is not able to perform its role. Using recombinant parathyroid hormone prevent disease progression and effective in improvement of disease. This study was done to design and build the desired construct genes, cloning process and synthesis of soluble parathyroid hormone in E. coli. Methods: In this laboratory study, design and optimization sequence of the gene parathyroid hormone (PTH) was carried out for expression of soluble proteins in bacteria. The construct contining PTH gene (puc 57) transformed into bacteria and cultivation was done in SOB medium then Plasmid extraction was performed. Fragment encoding the PTH was isolated by digestion of the cloning vector and ligate to expression vector (PET-32a). Subcloning process followed by induction with IPTG 1mM. The recombinant parathyroid hormon was expressed in bacteria, subsequently. Results: After enzymatic digestion, the fragment encoding the protein of interest was properly localized. The process was confirmed by polymerase chain reaction (PCR). Following performing a transformation, induction process performed by IPTG with final concentration 1mM that caused the soluble parathyroid proteins to be expressed in bacteria and the process was confirmed by Western blot technique. Conclusion: Protein expression in bacteria due to its rapid growth and the need to inexpensive medium is cost-effective. Soluble recombinant protein expression reduces downstream of recombinant protein production. پروتئین نوترکیب پاراتیروئید , وکتور بیانی , هضم آنزیمی , PCR Recombinant parathyroid hormone, Expression vector, Enzymatic digestion, PCR 112 118 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1-874&slc_lang=fa&sid=1 Aghajani MH محمدحسین آقاجانی shahbazim@goums.ac.ir 5900319475328460049879 5900319475328460049879 Yes M.Sc Student in Medical Biotechnology, Faculty of Advanced Medical SciencesTechnologies, Golestan University of Medical Sience, Gorgan, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی، دانشکده فن آوری‌های نوین، دانشگاه علوم پزشکی گلستان، گرگان، ایران Tahzibi A عباس تهذیبی 5900319475328460049880 5900319475328460049880 No Assistant Professor, Food and Drug Organization, Tehran, Iran استادیار، سازمان غذا و دارو، تهران، ایران Shahbazi M مجید شهبازی 5900319475328460049881 5900319475328460049881 No Associate Professor, Head of Cellular and Molecular Research, Center of Taleghani Hospital, Golesatn University of Medical Sciences, Gorgan, Iran دانشیار، مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی گلستان، گرگان، ایران