fa تشخیص سریع مایکوپلاسما پنومونیه به روش تکثیر هم‌دما به واسطه حلقه (LAMP) میکروب شناسی Microbiology تحقيقي Original Articles زمینه و هدف : باکتری مایکوپلاسما پنومونیه یکی از عوامل بسیار مهم در پیدایش عفونت‌های تنفسی است. روش‌های تشخیص سرولوژیکی و مولکولی هر کدام دارای محدودیت‌هایی هستند؛ به همین دلیل امکان استفاده از آنها در همه مراکز تشخیصی وجود ندارد. این مطالعه به منظور تشخیص سریع مایکوپلاسما پنومونیه با کمک پرایمرهای اختصاصی طراحی شده ویژه ناحیه P1 adhesin به روش تکثیر هم‌دما به واسطه حلقه انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی 92 نمونه بالینی از بیماران با پنومونی آتیپیک جمع‌آوری گردید. DNA نمونه‌ها با جوشاندن استخراج شد. 6 جفت پرایمر ویژه برای تکنیک LAMP به‌وسیله نرم‌افزار Primer Explorer ver 4 طراحی گردید. محصول LAMP به‌وسیله اضافه کردن سایبرگرین تشخیص داده شد. آزمون‌های حد تشخیص و ویژگی روی تست LAMP بهینه شده انجام شد؛ سپس آزمون بهینه شده بر روی نمونه‌ها انجام گردید. یافته‌ها : تست LAMP با استفاده از قطعه بزرگ آنزیم BST در 66 درجه سانتی‌گراد و زمان یک ساعت بهینه گردید. حد تشخیص آزمون در حد 1 CFU به‌دست آمد و با هیچیک از DNA عوامل مورد آزمون در ویژگی، تکثیری مشاهده نشد. از 92 نمونه بالینی جمع‌آوری شده توسط تکنیک LAMP 73 مورد (80درصد) مثبت و 19 مورد (20درصد) منفی تشخیص داده شدند. نتیجه‌گیری : تکنیک تکثیر هم‌دما به واسطه لوپ روشی ساده، مناسب و در دسترس برای شناسایی مایکوپلاسما پنومونیه است. Background and Objective: Mycoplasma pneumoniae bacteria, is one of the most important factor in causing of respiratory infections. Serological and molecular detection methods have their own limitation. Due to this limitation, the application of these methods in all diagnostic laboratories is not possible. Therefore this study was done to determine the rapid detection of Mycoplasma pneumonia by loop mediated isothermal amplification (LAMP). Methods: In this descriptive laboratory study, nasopharynx samples were collected from 92 patients with atypical pneumonia. DNA sample were extracted by boiling method. Six specific primer pairs were designed for LAMP technique by primer explorer ver 4 software. LAMP product identified by adding SYBR Green. Limit of detection and specificity tests have been done for optimizing LAMP test and optimized test carry out for each sample. Results: The LAMP test was optimized using the large Bst enzyme fragment at 66 degree temperature for 1 hour. The detection limit of the test obtained 1 CFU and the DNA replication does not observed in non of the examined pathogenic factors. Out of 92 clinical samples using LAMP technique, 73 cases were negative (80%) and 19 cases were positive (20%). Conclusion: The loop-mediated isothermal amplification technique is simple, convenient and available method for detection of Mycoplasma pneumoniae. پنومونی آتیپیک , مایکوپلاسماپنومونیه , تکثیر هم دما به واسطه حلقه Atypical pneumonia, Mycoplasma pneumoniae, Loop mediated isothermal amplification 127 133 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1-855&slc_lang=fa&sid=1 Davudi-Asl F فائزه داوودی اصل 5900319475328460049973 5900319475328460049973 No M.Sc Student in Cell and Molecular Biology, Science and Research Branch (Kordestan), Islamic Azad University, Sanandaj, Iran کارشناس ارشد زیست‌شناسی سلولی و مولکولی، گروه سلولی مولکولی، واحد علوم و تحقیقات کردستان، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران Shahhosseiny MH محمدحسن شاه حسینی shahhosseiny@yahoo.com 5900319475328460049974 5900319475328460049974 Yes Associate Professor, Department of Microbiology, Shahr-e-Qods Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran and Iranian Gene Fanavar Institute (IGF), Tehran, Iran دانشیار، گروه میکروبیولوژی، واحد شهر قدس، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران و مدیرعامل مؤسسه ایرانیان ژن فناور، تهران Keshavarz F فاطمه کشاورز 5900319475328460049975 5900319475328460049975 No M.Sc Student in Cell and Molecular Biology, Science and Research Branch (Kordestan), Islamic Azad University, Sanandaj, Iran کارشناس ارشد زیست‌شناسی سلولی و مولکولی، گروه سلولی مولکولی، واحد علوم و تحقیقات کردستان، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران