fa تشخیص توکسین حساس به حرارت باکتری اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک با استفاده از تکنیک PCR-ELISA میکروب شناسی Microbiology تحقيقي Original Articles زمینه و هدف : اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک (ETEC) شایع‌ترین عامل اسهال باکتریایی در سراسر دنیا است. باکتری ETEC در سطح سلول‌های اپی‌تلیالی روده کوچک کلنیزه شده و بعد انتروتوکسین مقاوم به حرارت (ST) و یا حساس به حرارت (LT) را ترشح می‌کند که با ورود به سلول‌ها باعث خروج آب و الکترولیت از سلول‌های اپی‌تلیالی روده شده و نهایتاً موجب اسهال می‌گردد. این مطالعه به منظور تشخیص توکسین LT باکتری اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک با استفاده از تکنیک PCR-ELISA انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه توصیفی با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و با کمک روش PCR-ELISA تشخیص توکسین LT باکتری ETEC انجام شد. در این روش محصولات نشاندار شده توسط دیگوکسیژنین، به کف ظرف‌های دارای استرپتواویدین منتقل و به کمک آنتی‌بادی ضد دیگوکسی ژنین کونژوگه شناسایی شدند. همچنین از کاوشگر داخلی نشاندار با بیوتین برای تایید محصولات PCR استفاده گردید. یافته‌ها : توکسین LT با کمک روش PCR-ELISA شناسایی شد و میزان حساسیت آن 1.9 نانوگرم بود. همچنین این روش هیچگونه واکنش متقاطع با باکتری‌هایی از این خانواده نداشت. نتیجه‌گیری : روش PCR-ELISA 100 برابر حساس‌تر از روش PCR معمولی بوده و به‌دلیل عدم نیاز به ژل آگارز و دستگاه الکتروفورز می‌تواند جایگزین مناسبی برای روش‌های قدیمی باشد. Background and Objective: Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) are the most common agent which causes diarrhea, worldwide. ETEC is colonized along the cells and then producing heat-labile (LT) and heat-stable enterotoxigenic which enter into intestinal epithelial cells and causes water and electrolyte loss from intestinal epithelial cells and eventually cause diarrhea.This study was done to detect the heat-labile toxin in Enterotoxigenic Escherichia coli using PCR-ELISA technique. Methods: In this descriptive study, DIG-labeled PCR products were bounded to streptoavidin-coated wells of a microtiter plate and detected by anti-DIG–peroxidase conjugate. The biotin-labeled internal probe was used for verification of PCR products. Results: Heat-labile toxin was detected by PCR-ELISA method. The sensitivity of heat-labile toxin was 1.9 ng. This method did not cross-react with bacteria from this variety. Conclusion: PCR-ELISA method is 100 times more sensitive than conventional PCR method and due to lack of agarose gel and electrophoresis device it can be a good alternative to traditional method. اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک , انتروتوکسین LT و PCR-ELISA Enterotoxigenic Escherichia coli, PCR-ELISA, Heat-labile enterotoxin 114 121 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1-852&slc_lang=fa&sid=1 Esfandiari P پانته‌آ اسفندیاری 5900319475328460049964 5900319475328460049964 No Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran and Department of Biology, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damghan, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد ژنتیک، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) و گروه زیست شناسی، واحد دامغان، دانشگاه آ Amani J جعفر امانی jafar.amani@gmail.com 5900319475328460049965 5900319475328460049965 Yes Associate Professor, Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشیار، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) Imani Fooladi AA عباسعلی ایمانی فولادی 5900319475328460049966 5900319475328460049966 No Associate Professor, Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشیار، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه‌الله (عج) Forghanifard MM محمدمهدی فرقانی 5900319475328460049967 5900319475328460049967 No Assistant Professor, Department of Biology, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damghan, Iran استادیار، گروه زیست شناسی، واحد دامغان، دانشگاه آزاد اسلامی، دامغان، ایران Mirhossaini SA سیدعلی میرحسینی 5900319475328460049968 5900319475328460049968 No Ph.D Candidate in Bacterial Toxin, Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشجوی دکتری توکسین‌های میکروبی، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)